緩沖液AP1和AP3/E可能在儲(chǔ)藏過(guò)程中沉淀，使用前檢查，必要時(shí)65攝氏度預(yù)熱溶解(注意加完乙醇后就不能再加熱)

　　緩沖液APW和AP3/E*次使用時(shí)要加入適量乙醇(96%-99.99%)

　　1. 研磨前擦拭工作臺(tái)。

　　2. 研缽里加入液氮，預(yù)冷。研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。液氮預(yù)冷離心管后加入材料，加至1/2或2/3處。若暫時(shí)不加緩沖液，就放入至液氮冷凍，用時(shí)拿出。拿出后立即輕輕開蓋，防止材料噴出。

　　3. 加入440μl 緩沖液AP1(必須為預(yù)熱好的)，。蓋好后使勁顛倒混勻材料和緩沖液。

　　4. 加4μlRNase 后，劇烈渦旋，使管底的材料也與液體混合。

　　5. 將混合物在65攝氏度下溫浴15min,每5min中上下輕輕顛倒試管2-3次。準(zhǔn)備冰盒。加入130μl 緩沖液AP2，上下顛倒混勻，在冰上放置5Min。14000rpm/min離心5min.仔細(xì)緩慢將上層液體(500μl )置于QIAshredder Mini Spin Colum (柱)中(紫色)。14000rpm/min離心2min.

　　6. 將上步中的濾液(450μl )緩慢吸至一新的離心管(自己準(zhǔn)備的Axygen 離心管)中，注意別吸到管底細(xì)胞碎片小球。

　　7. 在溶解清液中仔細(xì)緩慢加入1.5倍體積(675μl )的緩沖液AP3/E。一定要仔細(xì)，慢慢抽吸至兩者充分混勻。

　　8. 將上步中650μl 混合液(包括形成的沉淀)加入Dneasy Mini Spin Colum (柱)中(白色)，其余的混合液留著，用于再次抽提。≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)離心1Min ，丟棄廢液。準(zhǔn)備滅菌的去離子水于65攝氏度水浴鍋中預(yù)熱。

　　9. 剩余的混合液繼續(xù)加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum (柱)中，≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)離心1Min ，丟棄廢液和收集管。

　　10. 將Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置QIAGEN 試劑盒提供的2ml 離心管(取時(shí)手不要伸進(jìn)去，隔著塑封袋捏出離心管)。加入500μl 緩沖液A W ，放置3-5min ，≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)離心1Min, 丟棄廢液，收集管再用一次。

　　11. Dneasy Mini Spin Colum (柱)中加入500μl 緩沖液A W ，放置3-5min ，14000rpm/min離心3Min, 丟棄廢液, 收集管再用一次。

　　12. Dneasy Mini Spin Colum(柱)中加入500μl 無(wú)水乙醇，放置3-5min ，14000rpm/min離心3Min, 丟棄廢液和收集管

　　13. 在Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置1.5或2ml 離心管(自己準(zhǔn)備的Axygen 離心管),吸取100μl 滅菌的去離子水(必須為預(yù)熱的)加到Dneasy 膜上。65攝氏度水浴5min 。≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)離心1min 洗提DNA 。