Nalgene程序降溫盒經(jīng)驗1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于zui底線。

　　Nalgene程序降溫盒肯定是先放在室溫，然后放進去細胞，置于-80，利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。

　　Nalgene程序降溫盒經(jīng)驗2：實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。

　　Nalgene程序降溫盒經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。

　　異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請注意清理!

　　Nalgene程序降溫盒經(jīng)驗4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響。

　　Nalgene程序降溫盒經(jīng)驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。

　　Nalgene程序降溫盒盒這個梯度降溫可大大提高細胞凍存的存活率，由于Nalgene程序降溫盒存在99.99%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此Nalgene程序降溫盒也可以用于細胞復(fù)蘇。